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    環氧乙烷滅菌操作程序

    (1) 根據試驗要求,製備枯草杆菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內密封包裝,每袋2片。每次試驗用20袋。
    (2) 將滅菌器上、中、下3層,每層內、中、外各設一點,共設9點。每點物品中間布放1袋,共需18袋試驗菌片。另將一袋(2片)菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。
    (3) 按使用說明書所規定的環氧乙烷濃度、作用時間、櫃內的溫度和相對濕度,在滿載條件下進行環氧乙烷滅菌處理。滿載用物品,隨滅菌器用途而定。處理完畢,取出菌片,分別移種於5 ml 營養肉湯培養基中,置37℃ 培養箱內培養,7d後觀察最終結果(定性培養檢測)。
    對難以判斷結果的營養肉湯管,取其中0.2ml懸液接種營養瓊脂平板,用無菌L棒塗抹均勻,置37℃ 培養箱內培養。48h後塗片染色,顯微鏡下觀察菌落形態,或進一步做其他試驗,判斷有無生長或生長的是否為試驗菌。若為非試驗菌,則應重新進行試驗。
    (4) 測試中,應同時設立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。
    (5) 定量陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待消毒或滅菌試驗組達規定作用時間後,立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中,各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進行活菌培養計數。
    (6) 定性陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待滅菌試驗組達規定作用時間後,立即將該菌片2 片,分別接種於5.0ml 營養肉湯培養基,放入溫箱中作定性培養,觀察有細菌生長情況。
    (7) 陰性對照組,以同批次試驗用未染菌樣片2 片,分別接種於5.0ml 營養肉湯培養基,同時將未接種過的營養肉湯培養基放入培養箱中作定性培養,觀察有無細菌生長。
    (8) 試驗重複5 次。
    (9)在5次試驗中,每次試驗中的陽性對照菌片,回收菌量均應在5×10cfu/片~5×10cfu/片;定性陽性對照組,細菌生長良好;陰性對照應無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結果,試驗作廢,重新進行。


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